检测范围
62.5 pg/mL – 2000 pg/mL
用途
定量检测血清、血浆、细胞培养上清和组织等样本中的鱼蛋白激酶C （PKC）浓度。
检验原理
本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗鱼蛋白激酶C （PKC）抗 体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入鱼蛋白激酶C （PKC）标准品和待测样本，再加入另一株 HRP标记的抗鱼蛋白激酶C （PKC）抗体（HRP标记抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组 分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-HRP标记抗体的夹心复合物。加入显色底物A和B，底物 在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色。在酶标仪450nm波 长上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中鱼蛋白激酶C （PKC）的浓度正相关。拟 合标准品曲线，可以计算出样本中鱼蛋白激酶C （PKC）的浓度。
特异性
本试剂盒识别天然和重组鱼蛋白激酶C（PKC）。
精密度
批内精密度：三组已知的高、中、低浓度样品，进行二十次在不同板块内精度评估。批内变异系 数CV%小于8%。
实验所需自备物品
1）能够检测 450 nm 吸光度的酶标仪 2）移液器及枪头、加样槽 3）3.37℃恒温箱或水浴锅 4）准备试剂用的试管、离心管、量筒等 5）蒸馏水或去离子水 6）涡旋振荡器、微孔板振荡器
操作步骤
1）试剂、样本平衡：检测之前请将所有的试剂、样本平衡至室温，标准品、质控品和样品，建议 做复孔。 配置工作液：按前面试剂准备中描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。 2）加标准品、样本：设置标准品孔、样本孔和空白孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL， 样本孔加待测样本50μL，空白孔不加。 3）加 HRP标记抗体：除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体 100μL。 4）孵育：使用封板膜封板，37℃水浴锅或恒温箱温育60分钟。 5）洗涤：弃掉液体，每孔加入300μL洗液洗板，静置20s，洗涤5次。每次洗板，在吸水纸上拍 干。为获得理想的实验性能，必须彻底移除残留液体。 6）加底物显色：每孔加入50μL显色底物A、B 各50μL，37℃水浴锅或恒温箱温育15分钟。 7）加终止液：每孔加入50μL终止液。颜色由蓝色变为黄色。如果颜色呈现绿色或者颜色的变化 明显不均匀，请轻轻叩击板框，充分混匀。 8）检测读数：在 15分钟之内，使用450nm酶标仪进行检测读数。
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